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岭南现代临床外科 ›› 2011, Vol. 11 ›› Issue (01): 9-12.

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热诱导调控序列的合成及其热诱导特性的研究

周嘉嘉,邓小耿,陈汝福,唐启彬,周泉波   

  1. 中山大学孙逸仙纪念医院
  • 通讯作者: 周嘉嘉
  • 基金资助:
    国家自然科学基金资助项目;国家高科技计划(863)基金资助项目

  • Received:2010-09-28 Revised:2010-12-23 Online:2011-02-20 Published:2011-03-08

摘要： 目的 探讨合成热诱导性的HSP70启动子调控序列，并鉴定加热条件下诱导其下游报告基因表达的特性。方法 利用PCR方法，以肝癌细胞株HepG2基因组为模板，体外合成热休克蛋白70（HSP70）启动子序列。利用双酶切法构建HSP70启动子调控的含EGFP报告基因的真核表达载体pcDNA-HSP70-EGFP。以脂质体为载体，体外转染肝癌细胞株HepG2，在不同的温度下（37℃、39℃、41℃、43℃、45℃）加热不同时间（0、15、30、45、60min）后，利用流式细胞术检测报告基因EGFP表达强度，从而判定温度及时间对HSP70启动子热诱导活性的影响。结果 合成的HSP70启动子序列测序结果与GeneBank 中AL671762所提供序列完全一致。低温加热后EGFP在HepG2细胞中的表达强度不同程度增强，在43℃/30 min 时最为明显，为未加热组的3.3倍。结论 成功合成可热诱导的HSP70启动子序列；HSP70启动子在低温加热下能明显增强其下游外源基因的表达，为进一步研究肿瘤热疗-基因治疗提供了实验基础。

关键词: 热休克蛋白70, 启动子, 加热, 报告基因, 基因表达

中图分类号: 

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