岭南现代临床外科 ›› 2019, Vol. 19 ›› Issue (03): 293-302.DOI: 10.3969/j.issn.1009-976X.2019.03.011
王雄,王文己,谢瑞敏,李想,王勇平
WANG Xiong, WANG Wenji, XIE Ruimin, LI Xiang, WANG Yongping
摘要: [摘要] 目的 探讨FOXO1对骨肉瘤细胞侵袭迁移能力的影响及机制。方法 采用实时荧光定量PCR(qRT?PCR)的方法检测人正常成骨细胞hFOB 1.19和人骨肉瘤细胞U2OS、MNNG/HOS中FOXO1的mRNA表达水平。利用pcDNA3.1?FOXO1重组质粒建立FOXO1过表达的细胞模型,空载质粒(pcDNA3.1?vector)作为对照,qRT?PCR和蛋白质印迹法(Western blot)验证转染效率。确定成功过表达FOXO1基因后利用Cell Counting Kit?8(CCK?8)实验检测骨肉瘤细胞的增殖能力(吸光度值),Transwell实验体外检测骨肉瘤细胞的侵袭和迁移能力,并采用qRT?PCR和western blot的方法检测基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达变化。结果 人骨肉瘤细胞MNNG/HOS、U2OS中FOXO1的mRNA的表达水平显著低于人成骨细胞hFOB 1.19(P<0.05),且骨肉瘤细胞U2OS的FOXO1的表达水平较低。重组质粒pcDNA3.1?FOXO1转染后,骨肉瘤细胞U2OS的FOXO1表达水平显著升高。与对照组(pcDNA3.1?vector)比较,U2OS?FOXO1过表达组的细胞的增殖能力降低(P<0.05),侵袭迁移和迁移能力降低,MMP9较对照组表达水平明显降低(P<0.05)。结论 骨肉瘤细胞中FOXO1表达水平明显低于正常成骨细胞。过表达FOXO1可能通过下调MMP9抑制骨肉瘤细胞的侵袭和迁移能力。
中图分类号: